Лаборатория иммунологии опухолей
отдела вирусологии и иммунологии опухолей
ИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи

Наталия Владимировна Энгельгардт
в группе сотрудников университета в Дакаре
 

Собранный за 2 месяца работы в Дакаре материал был обработан в Москве. Мы столкнулись с тем, что АФП обнаруживался не только в опухолях, но и в различных органах за счет того, что он присутствовал в сыворотке крови и проникал вместе с кровью в клетки с поврежденной проницаемостью мембран. Поэтому был введен специальный контроль на поврежденные клетки по локализации на соседних серийных срезах АФП и γ-глобулина – сывороточного белка, который не синтезируется гепатоцитами.

Специфическое присутствие АФП (без γ-глобулина) наблюдалось только в части клеток гепатокарцином.

Первая совместная с французскими учеными публикация по локализации АФП в гепатокарциномах человека появилась в 1971 г.

Разработка высокочувствительных методов

Г.И. Абелев придавал большое значение созданию и применению высокочувствительных методов. Статья Г.И. Абелева и Р.Д. Бакирова по авторадиографии вошла в руководство «Иммунохимический анализ».

Другим высокочувствительным методом, налаженным им вместе с Д.А. Эльгорт, стала иммуноауторадиография (ИАР), сочетающая иммунодиффузию с предельно разведенными тест-системами с последующим выявлением невидимых преципитатов антителами к IgG, меченными I¹²⁵. Метод был использован в двух принципиальных исследованиях.

1. Ранее в работе Г.И. Абелева, Е.С. Иевлевой и Н.В. Энгельгардт группо-специфический антиген лейкозных вирусов мышей был обнаружен на мембране лейкозных клеток, и с помощью обычной преципитации найден в экстрактах селезенок мышей большинства линий.

ИРА позволила выявить этот антиген у всех индивидуальных мышей как высоко-, так и низколейкозых линий.

Это было
первое обнаружение эндогенных ретровирусов С типа у мышей.

2. Метод ИАР определял АФП с чувствительностью 40 нг/мл, что соответствовало порогу нормального содержания его в сыворотках людей. С его помощью были повторно проверены АФП-отрицательные при стандартной постановке реакции сыворотки больных с гепатоцеллюлярным раком, с тератокарциномами и из африканской коллекции. Полученные результаты более точно отражали действительную картину: АФП при гепатокарциномах в Европе и России встречался более чем в 70% случаев, а в Африке – более чем в 80%; при тератобластоме яичка он обнаруживался более чем в 80%, а при обычной постановке – в 30%.; был обнаружен кратковременный подъем уровня АФП при вирусном гепатите. Наибольшая частота и высокий уровень АФП наблюдался при детских гепатобластомах.

Возможности клинического применения теста на АФП в онкологии и при гепатитах были в значительной степени определены.

Эти результаты стали основой диссертации Д.А. Эльгорт.

Работа шла, а ситуация в стране и в Институте менялась. Весной 1968 г., когда Г.И. Абелев был в Африке, наш большой друг, заведующий лабораторией биосинтеза антител, А.Е. Гурвич подписал письмо против нарушения юридических норм в ходе процесса над А. Гинзбургом. В течение трех месяцев администрация Института добивалась от него отказа от подписи. На Ученом совете 28 июня 1968 г. А.Е. Гурвич был забаллотирован при переизбрании на заведование лабораторией. На этом же Ученом совете Виктор Тер-Григоров, проголосовавший на собрании против осуждения Израиля за 6-дневную войну, был забаллотирован на место мнс и затем уволен из Института. У нас были тесные дружеские и научные связи с чешскими учеными. Мы тяжело переживали введение наших войск в Чехословакию в августе 1968 г.

Гарри Израйлевич Абелев и Арон Евсеевич Гурвич
 

Арон Евсеевич Гурвич
 

До середины 1971 г. отдел продолжал получать общественное признание – ему было присвоено звание «Бригада коммунистического труда», вручено Переходящее Красное знамя Ворошиловского района г. Москвы.

Летом 1971 г. ситуация резко ухудшилась. Это подробно описал Г.И. Абелев в «Очерках научной жизни». За отказ сотрудничать с КГБ он стал «невыездным», его кандидатура на место члена-корреспондента АМН СССР была снята.

В такой обстановке в сентябре 1971 г. в ИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи проходила ВОЗовская школа по иммунологии. Лекторами в ней были ведущие зарубежные ученые. Невзирая на это, директор принял строгие меры, чтобы ограничить число слушателей и исключить возможность дискуссий и общения. Ситуация обострилась тем, что в это время подал заявление на выезд в Израиль сотрудник лаборатории И.М. Лямперт. Вскоре вопрос об его увольнении был поставлен на Ученом совете. Понимая, что О.В. Бароян хотел организовать показательное шельмование, Г.И. Абелев и А.Е. Гурвич не пришли на этот совет.

В ответ директор О.В. Бароян решил расформировать отдел.

Расформирование
отдела вирусологии и иммунологии опухолей.
Работа в конфронтации с директором
(10.11.1971 – 30.05.1977 гг.)

10 ноября 1971 г. – как раз в день 5-й годовщины со дня смерти Л.А. Зильбера – О.В. Бароян объявил Г.И. Абелеву об упразднении отдела вирусологии и иммунологии опухолей.

Создавался отдел этиологии и диагностики рака, и организовывались две новые лаборатории – иммунохимии и диагностики опухолей и вирусной этиологии опухолей. Изменение названия означало уничтожение старой структурной единицы и объявление конкурса на вакантные должности всех научных сотрудников.

Мы не подчинились этому несправедливому приказу. Борьба Г.И. Абелева и сотрудников против оскорбительного приказа, участие в ней научной общественности Москвы подробно описаны в книге Г.И. Абелева «Очерки научной жизни». Г.И. Абелев подал заявление об уходе, серьезно обсуждались варианты перехода в ИЭКО, в МГУ, переезд в другие города, сотрудники обращались с письмами протеста в ЦК КПСС, в Президиум АМН, в ВЦСПС, не подавали документов на конкурс, хотя срок его истек.

 

Г.И. Абелев
 

В конце декабря Президиум АМН уговорил Г.И. Абелева взять обратно свое заявление под гарантию восстановления отдела в ближайшие сроки и избрания по конкурсу всех сотрудников. Лишь по просьбе Г.И. Абелева сотрудники подали заявления на конкурс. В дальнейшем О.В. Бароян неоднократно нарушал эти договоренности; при избрании была забаллотирована И.Н. Крюкова. Борьба продолжалась. Только в марте 1972 г. отдел был восстановлен приказом Президента АМН. Вирусологическая лаборатория была разделена на две. И.Н. Крюкова была восстановлена и стала заведующей одной из вирусологических лабораторий. Туда перешли самые сильные сотрудники – К.В. Ильин, И.С. Ирлин, И.Б. Обух, З.Н. Тихонова, к ним присоединились Ю. Чуев, Е. Комарова и А. Гудков, а в группу Д. Брондза пришли А. Суслов, А.В. Андреев и С. Егорова.

 

Слева направо:
Ирина Борисовна Обух, Андрей Владимирович Гудков, Елена Комарова
 

Анатолий Витальевич Андреев
 

Анатолий Петрович Суслов (справа), Арон Евсеевич Гурвич
 

Борьба отняла у всех и особенно у Г.И. Абелева много сил и здоровья. Он, никогда не прекращавший экспериментальную работу, несмотря на преподавание в МГУ, обдумывание обзоров, почти полгода не подходил к лабораторному столу. В институте сохранились отношения главным образом с иммунологическими лабораториями. Работа продолжалась в обстановке практически полной изоляции от внешнего мира. Выручал небольшой валютный фонд от ВОЗ'а.

Постепенно работа начала входить в колею. Продолжались публикации как в отечественных, так и в международных журналах.

Разрабатывались высокочувствительные методы определения антигенов – электрофорез-преципитация в полиакриламидном геле (ЭПАГ) с чувствительностью 1нг/мл, капилярный микро-ЭПАГ, иммунодиффузия на ацетат-целлюлозных пленках.

Г.И. Абелев. Сверхчувствительный радиоиммунодиффузионный метод определения антигенов // Бюлл. Эксп. Биол. Мед., №2, 122-125, 1973 Г.И. Абелев, С.Д. Перова. Ультрамикрометод определения антигенов. Бюлл. Эксп. Биол. Мед., №6, 120-123, 1975 G.I. Abelev, S.D. Perova, A.A. Sokolenko. High-sensitivity radioimmunodiffusion tests for tumor-associated antigens. Ann. New York Acad. Sci., 276, 75-90,1976

Г.И. Абелевым и С.Д. Перовой совместно с П.З. Будницкой и Е. Любашевской был выпущен первый в стране диагностикум на гепатит Б.

Г.И. Абелев, С.Д. Перова, П.З. Будницкая. Т.У.42.К.В.С.10-74 на получение иммунодиагностикума для выявления антигена гепатита В и антител к нему, 1974

Изучение клеточных основ синтеза АФП

В фундаментальных исследованиях главным направлением стало изучение клеточных основ синтеза АФП – в тератокарциномах, в нормальном развитии, при регенерации печени.

Эти проблемы обсуждались на конференциях лаборатории, их рассматривал Г.И. Абелев в очередном обзоре

G.I. Abelev. α-Fetoprotein as a marker of embryo-specific differentiations in normal and tumor tissues // Transplant. Rev. 20, 3-37, 1974

Тератокарциномы. В онтогенезе синтез АФП был найден в желточном мешке и печени эмбрионов, но оставалось неизвестным, какие клетки продуцируют АФП в тератокарциномах. При исследовании перевиваемой тератокарциномы мышей, полученной от д-ра Л.Стивенса из Джексоновской лаборатории, США, было показано, что в тератокарциномах АФП синтезируют аналоги клеток висцеральной энтодермы желточного мешка и их производные.

N.V. Engelgardt, V.S. Poltoranina, A.K. Yazova. Localization of alpha-fetoprotein in transplantable murine teratocarcinomas // Int. J. Cancer 11, 448-459, 1973

Динамика АФП в раннем онтогенезе у мышей и крыс. В эмбриональной и ранней постнатальной печени крыс и мышей АФП присутствовал в подавляющем числе гепатоцитов. После рождения процент положительных гепатоцитов и интенсивность их флуоресценции резко падала с четко выраженным градиентом по дольке от перипортальной области к центральной вене. Последние АФП+ гепатоциты всегда окружали центральную вену.

Л.Я. Шипова, А.И. Гусев, Н.В. Энгельгардт. Иммуногистохимическое изучение α-фетопротеина и сывороточного альбумина в ранний постнатальный период у мышей // Онтогенез, 5, №1, 53-60, 1974 Л.Я. Шипова, А.И. Гусев. Альфа-фетопротеин в печени эмбрионов и новорожденных крыс // Онтогенез №7, 392-395, 1976 Л.Я. Шипова. Локализация альфа-фетопротеина (АФП) в онтогенезе крыс и мышей. Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук. М., 1977

Гипотеза «структурной репрессии» АФП. Структура печеночной балки в перинатальной печени формируется в том же направлении – от перипортальной области к центральной вене. Поэтому Г.И. Абелевым была предложена гипотеза «структурной репрессии» АФП – подавление экспрессии АФП в гепатоцитах происходит при вхождении их в балку и реэкспрессия его синтеза – при разрушении структуры балки.

Эта гипотеза была проверена и подтверждена в исследованиях по индукции АФП в регенерирующей печени мышей после отравления ССl₄. В них активно участвовали аспирантка Маша Лазарева, Толя Глейберман, большую помощь оказывала М.Д. Глышкина.

 

Анатолий Симонович Глейберман
 

Мария Дмитриевна Глышкина и Мария Николаевна Лазарева
 

После отравления ССl₄ в печени мышей возникали некрозы вокруг центральных вен, а по их границам обнаруживались АФП+ гепатоциты. Перинекротическая локализация АФП+ гепатоцитов не зависела от положения некроза в печеночной балке – после индукции другими гепатотоксинами некрозов в перипортальной зоне на границе с ними также появлялись АФП+ гепатоциты.

Н.В. Энгельгардт, В.С. Полторанина, М.Н. Лазарева, С.Д. Перова, А.С. Глейберман. Синтез и локализация α-фетопротеина в нормальной и регенерирующей печени мыши // Бюлл. Эксп. Биол. Мед., 82, №10, 1251-1254, 1976 М.Н. Лазарева. Характеристика α-фетопротеин-содержащих гепатоцитов в регенерирующей печени мыши // Бюлл. Эксп. Биол. Мед., №7, 97-101, 1977 М.Н. Лазарева. Клеточные основы синтеза опухолево-эмбрионального белка (альфа-фетопротеина) при регенерации печени у мышей. Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук. М., 1977

Обратимость репрессии АФП в гепатоцитах Принципиальным был вопрос, может ли АФП при регенерации реэкспрессироваться в обычных гепатоцитах или же при этом возникает новая популяция гепатоцитов. В сотрудничестве с В.Я. Бродским, В.М. Фактор и И.В. Урываевой (лаборатория цитологии ИБР АН СССР) регенерация печени у мышей была вызвана на фоне насыщающей метки ³Н-тимидином. При этом часть ядер АФП+ гепатоцитов не включила метки, т.е. это были исходные клетки, не прошедшие деления.

N.V. Engelhardt, M.N. Lazareva, G.I. Abelev, I.V. Uryvaeva, V.M. Factor, V.Ya. Brodsky. Detection of α-foetoprotein in mouse liver differentiated hepatocytes before their progression through S phase. Nature, 263, 146-148, 1976 N.V. Engelhardt, M.N. Lazareva, I.V. Uryvaeva, V.M. Factor, V.S. Poltoranina, A.S. Gleiberman, V.Ya. Brodsky, G.I. Abelev. Alpha-fetoprotein in adult differentiated hepatocytes of the regenerating mouse liver. In: Oncodevelopmental Gene Expression, Eds. W. Fishman & S. Sell, Academic Press, 533-539, 1976

Отсутствие в онтогенезе смены клона эмбриональных гепатоцитов на клон взрослых гепатоцитов было установлено в работах Т.Л. Эрайзер, С.Д. Перовой и Д.А. Эльгорт. Используя метод локального гемолиза в геле и высокочувствительные методы определения АФП, авторы показали, что большинство одиночных гепатоцитов эмбриона человека 6-13 недель или их микроколоний синтезируют одновременно сывороточный альбумин и АФП. Следовательно, наблюдаемая в онтогенезе смена белков сыворотки крови эмбрионального типа на белки зрелого типа обусловлена репрессией эмбриоспецифических генов, а не сменой эпигенетически различных клонов гепатоцитов, как ранее предполагалось.

 

Татьяна Леонидовна Эрайзер
 

С.Д. Перова, Т.Л. Эрайзер, Г.И. Абелев. Синтез α-фетопротеина одиночными гепатоцитами и микроколониями гепатоцитов человека in vitro // Бюлл. Эксп. Биол. Мед., №4, 481-484, 1977 Т.Л. Эрайзер. Исследование экспрессии эмбриоспецифических генов в гепатоцитах человека. Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук. М., 1977 Т.Л. Эрайзер, Д.А. Эльгорт, Г.И. Абелев. Синтез α-фетопротеина и альбумина гепатоцитами эмбриона человека // Бюлл. Эксп. Биол. Мед., №6, 711-713, 1977

Успешно развивались исследования нерастворимых антигенов плазматической мембраны гепатоцитов. В этой работе к Т.Д. Рудинской (Белошапкиной) и Н.И. Куприной (Храмковой) присоединились Е.Ф. Якименко, О.А. Гаврилова и Ю.С. Хац.

 

Аида Афанасьевна Соколенко и Екатерина Федоровна Якименко
 

Ольга Александровна Гаврилова (Сальникова)
 

Юлия Самуиловна Хац
 

Специфическое распределение этих антигенов на различных доменах плазматической мембраны гепатоцита оказалось ценным маркером целостности печеночной балки. Детально был охарактеризован антиген желчных капилляров, идентифицированный в дальнейшем как адгезионный белок семейства IgG-глобулинов, экспрессия которого связана с подавлением опухолевого роста.

Е.Ф. Якименко, Н.И. Храмкова, Т.Д. Рудинская. Антигенная структура плазматических мембран клеток печени мыши. III. Липидные гаптены // Цитология, 19, 545-551, 1977 Е.Ф. Якименко, Т.Д. Белошапкина, Н.И. Храмкова, А.С. Глейберман. Иммуногистохимическое изучение кардиолипина и фосфатидилинозита в печени мыши // Бюлл. Эксп. Биол. Мед., №9, 332-335, 1978

Исследования вирусных лейкозов мышей. О.М. Лежнева и Н.А. Дорфман обнаружили группоспецифичский антиген вируса Гросса на мембране лейкозных клеток, что определяло толерантность мышей к вирусу.

О.М. Лежнева. Типоспецифический антиген вируса лейкемии Гросса в опухолях и нормальных тканях и его идентификация методами иммунодиффузии // Бюлл. Эксп. Биол. Мед., №2, 217-219, 1976 O.M. Lezhneva, G.I. Abelev, N.A. Dorfman, V. Strand, G.T. August. Localisation of murine oncornavirus 15.000 D – virion protein on the membrane of neoplastics cells: analysis by immunofluorescent and immunoelectron microscopy // Virology, 75, 281-292, 1976

Дифференцировочный антиген эритробластов мышей (АГ-ЭБ) был выделен и охарактеризован Е.С. Иевлевой. Аналог этого антигена позднее был найден у людей и нашел применение при диагностике парциальной красноклеточной анаплазии.

Е.С. Иевлева. Антигенная структура вирусного эритробластоза мышей. Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук. М., 1975 E.S. Ievleva, N.V. Engelhardt, G.I. Abelev. Specific antigen of murine erythroblasts // Int. J. of Cancer, 17, 798-805, 1976 Е.С. Иевлева, В.С. Тер-Григоров, И.А. Граф, А.В. Пивник, Л.И. Идельсон. Антигенный маркер эритрокариоцитов человека, сходный с антигеном эритробластов мыши // Бюлл. Эксп. Биол. Мед., №9, 330-332, 1978

Новым направлением стали работы А.И. Гусева и Э.Р. Карамовой по раково-эмбриональному антигену кишечника (РЭА). Отработанная ими схема очистки антигена повысила специфичность выявления этого маркера. Надежными помощниками в этой работе были Борис Дубов и Вера Горелова.

 

Вера Васильевна Горелова
 
 

*   *   *

Дирекция Института всячески ограничивала и затрудняла контакты отдела с зарубежными исследователями, но она не смогла остановить признание прежних и новых исследований. По-прежнему многие работы публиковались в престижных журналах и по-прежнему приходили приглашения на международные конференции и симпозиумы.

В 1973 г. была организована Международная исследовательская группа по изучению карцино-эмбриональных антигенов, превратившаяся вскоре в Международное Общество Опухолево-эмбриональной биологии и Медицины (ISOBM) с ежегодными конференциями и журналом. В 2012г. прошла 40-я конференция этого общества.

В августе 1974 г. фотографии Л.А. Зильбера и Г.И. Абелева были помещены на обложке “Cancer Research” как признание их выдающегося вклада в исследование рака.
 

На обложке Cancer Research – фото Л.А. Зильбера и Г.И. Абелева
 

В 1975 г. Г.И. Абелев получил премию Института Рака в Нью-Йорке в числе пятнадцати основоположников иммунологии рака. Выехать на торжественное вручение медали и премии ему не разрешили. Медаль привезли американские участники Советско-американского Симпозиума, который прошел в ОНЦ в 1976 г. Там же состоялась церемония вручения этой почетной награды.
 

 

Церемония вручения Г.И. Абелеву премии Нью-Йоркского института по изучению рака
как одному из основоположников иммунологии рака. ОНЦ, 1976
 

Золотая медаль. 1-я международная премия по иммунологии рака
Нью-Йоркского института по изучению рака
 
 

*   *   *

Обстановка конфронтации с дирекцией была тяжелой и выматывающей. Весной 1977 г. лауреат Нобелевской премии Х. Темин настоял на встрече с Г.И. Абелевым в институте. Беседа состоялась, но после нее Г.И. Абелев потерял сознание у себя в кабинете. Терпеть создавшее положение стало невозможно. Сотрудники попросили вмешаться заведующего отделом общей медицинской микробиологии В.Д. Тимакова, который был в это время Президентом АМН. После беседы с Гарри Израйлевичем В.Д. Тимаков издал приказ о переводе отдела в составе двух лабораторий со всем оборудованием в Онкологический научный центр. В конце мая 1977 г. мы ушли из ИЭМ им. Гамалеи, унося с собой память о годах счастливой и плодотворной работы и благодарность друзьям, сохранившимся во всех тяготах нашей борьбы.

 

О.В. Бароян. Рис. И.С. Ирлина
 

Исход. Рис. И.С. Ирлина
 

 

---

Хостинг от uCoz